Mutagenesis as a tool for improving lectins from pathogenic bacteria

Logo poskytovatele

Varování

Publikace nespadá pod Filozofickou fakultu, ale pod Přírodovědeckou fakultu. Oficiální stránka publikace je na webu muni.cz.
Název česky Mutageneze jako nástroj pro vylepšování lektinů z patogenních mikroorganismů
Autoři

MRÁZKOVÁ Jana POKORNÁ Martina WIMMEROVÁ Michaela

Rok publikování 2012
Druh Konferenční abstrakty
Fakulta / Pracoviště MU

Přírodovědecká fakulta

Citace
Popis Řízená evoluce je široce využívaná v proteinovém inženýrství pro produkcí proteinů s pozměněnými anebo vylepšenými vlastnostmi. Tento účinný nástroj zahrnuje několik hlavních přístupů. První je náhodná mutageneze, která je využívána pro tvorbu náhodných mutací kdekoliv v genu zájmu. Druhým je cíleně náhodná mutageneze, která je využívána k přípravě mutantů s náhodnými substitucemi v předem vybraných místech. Další metodou je místně cílená mutageneze, která je založená na racionálním designu a slouží pro vytváření specifických záměn aminokyselin ve vybraných místech. V této práci jsou využity dvě mutační techniky - cíleně náhodná mutageneze pomocí směsi oligonukleotidových primerů a místně cílená mutageneze pomocí primerů nesoucích specifické substituce. Lektiny jsou proteiny produkované různými mikroorganismy. Jsou schopné specificky vázat různé cukry. Tento fakt je velmi důležitý především při interakci hostitele s patogenem, kdy lektiny pomáhají patogenu v adhesi na cukerná residua přítomná na hostitelských buňkách. Pseudomonas aeruginosa, Ralstonia solanacearum a Burkholderia cenocepacia jsou příležitostné patogeny, které napadají především pacienty se sníženou imunitou. Tyto bakterie produkují lektiny, které vykazují významnou podobnost. PA-IIL lektin z bakterie P. aeruginosa byl vybrán jako primární cílový gen k modifikaci pomocí cíleně náhodné mutageneze. Tento rozpustný protein je velmi dobře charakterizován a vykazuje velmi vysokou afinitu pro L-fukosu ale váže ještě několik dalších monosacharidů s podobnou stereochemií např. L-galaktosu nebo D-mannosu. Ortology tohoto lektinu byly identifikovány v bakteriích R. solanacearum (RS-IIL) a B. cenocepacia (BC2L-A). Nicméně tyto dva lektiny preferují vazbu D-mannosy namísto L-fukosy. Cílem této práce je připravit Ca-dependentní lektiny čistě specifické pro L-fukosu. Lektiny s vylepšenými vlastnostmi mohou být později využity v biotechnologii a pro bioanalytcké účely.
Související projekty:

Používáte starou verzi internetového prohlížeče. Doporučujeme aktualizovat Váš prohlížeč na nejnovější verzi.