Stanovení polymorfizmu genů pro tvorbu koagulázy, rezistenci k meticilinu a 16S-23S mezerníkových oblastí rDNA genů u Staphylococcus aureus metodou PCR
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2000 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | 4th Workshop of Biochemists and Molecular Biologists. Biochemistry and molecular biology on the threshold of a new century |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Genetika a molekulární biologie |
| Popis | Kmeny Staphylococcus aureus rezistentní k meticilinu (MRSA) jsou častým zdrojem nozokomiálních infekcí představujících problém ve zdravotnických zařízeních. Pro léčbu má prvořadý význam rychlá a spolehlivá identifikace a charakterizace původce nákazy a jeho odlišení od nepatogenních kmenů. Bylo vybráno 11 kmenů MRSA v různých nemocnicích. Metodou PCR byla prokázána existence genu mecA, jež zodpovídá za rezistenci k meticilinu. Velikost amplifikačních produktů byla stejná u všech kmenů a po použití několika restrikčních endonukleáz nebyly zjištěny rozdíly v jejich nukleotidové sekvenci. Dále byly amplifikovány oblasti genu pro tvorbu koagulázy a regulační oblasti femA ovlivňující rezistenci k meticilinu. U amplifikačích produktů genu pro tvorbu koagulázy byl zjištěn polymorfismus délky restrikčních fragmentů, který však neumožňuje rozlišení všech kmenů. Restrikční analýza neprokázala odlišnosti v amplifikovaných sekvencích. Pro další analýzy, které by umožnily odlišit studované kmeny metodou PCR, byly použity primery, které amplifikují oblasti mezi geny pro 16S-23S rRNA. Tyto tzv. mezerníky jsou u S. aureus variabilní v počtu i velikosti. Výsledkem PCR byly pouze dva typy produktů, což koresponduje s hypotézou o monoklonálním původu MRSA. Pro potvrzení vhodnosti této metody k určování rozdílů v genomu bakterií bylo použito 13 kmenů S. aureus, reprezentujících 13 různých makrorestrikčních skupin. Amplifikace mezerníků prokázala odlišnosti mezi všemi kmeny. Na základě srovnání spekter PCR-produktů byl sestrojen dendrogram, znázorňující genetickou příbuznost kmenů, který byl porovnán s dendrogramem získaným z výsledků makrorestrikční analýzy DNA kmenů pomocí pulzní gelové elektroforézy. Mezi kmeny MRSA byl zjištěn kmen, jehož spektrum PCR-produktů se shoduje se spektrem produktů jednoho ze zástupců uvedených makrorestrikčních skupin. |
| Související projekty: |