Detekce profágů v kmenech <I>Staphylococcus aureus</I> pomocí multiplex PCR
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2002 |
| Druh | Článek v odborném periodiku |
| Časopis / Zdroj | Informační listy Genetické společnosti Gregora Mendela |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Genetika a molekulární biologie |
| Klíčová slova | Bacterial Typing Techniques; DNA; Bacteriophages; Staphylococcus aureus; Lysogeny; Multiplex PCR; Prophage detection |
| Popis | V genomech typizačních fágů S. aureus mezinárodní řady byly vyhledány sekvence specific-ké pro fágové druhy séroskupin A (fág 3A, 5 003 bp), B (fág 53, 3 926 bp), F (fág 77, 3 398 bp) a L (fág 187, 1 927 bp). Hybridizační sondy připravené z těchto sekvencí detekují v lyzogenních kmenench S. aureus profágy příslušných fágových druhů. K usnadnění detekce profágů byly pro každou ze specifických sond stanoveny sekvence a navrženy PCR-primery, umožňující získat pro každý fágový druh amplifikační produkt charakteristické velikosti (pro fágy serologické skupiny A: 3A-F 5' CTT TGA CAT GAC ATC CGC TTG AC 3' a 3A-R 5' TAT CAG GCG AGA ATT AAG GG 3', produkt 745 bp; pro fágy serologické skupiny B: 53-F 5' ACT TAT CCA GGT GGY GTT ATT G 3' a 53-R 5' TGT ATT TAA TTT CGC CGT TAG TG 3', produkt 405 bp; pro fágy serologické skupiny F: 77-F 5' TAC GGG AAA ATA TTC GGA AG 3' a 77-R 5' ATA ATC CGC ACC TCA TTC CT 3', produkt 548 bp a pro fágy serologické skupiny L produkt 850 bp). Optimalizací sady primerů byla zavedena multiplex PCR pro přímý důkaz přítomnosti profágů jednotlivých druhů v jediné PCR-reakci. Metoda detekce profágů byla ověřena jak na uměle lyzogenizovaných kmenech připravených na našem pracovišti, tak na kmenech z klinického materiálu. S využitím této techniky byly prokázány významné rozdíly v obsahu profágů u meticilin-rezistentních kmenů. Srovnání diskriminační schopnosti několika genotypizačních metod (PFGE, ribotypizace) prokázalo, že stanovení rozdílů v obsahu profágů představuje velmi citlivou typizační metodu, která je vhodná i pro odlišení blízce příbuzných kmenů. |
| Související projekty: |