Kinetické stanovení antiradikálové aktivity
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2003 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | 32. konference Syntéza a analýza léčiv |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Biochemie |
| Klíčová slova | DPPH; antiradicals; antioxidants; kinetics |
| Popis | Pro posouzení antioxidační aktivity se často používají jednoduché spektrofotometrické testy. K nejvíce používaným testům patří zhášení stabilního radikálu 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazylu (DPPH). Antiradikálový účinek se zpravidla vyjadřuje v hodnotách EC50, tedy jako koncentrace antioxidantu, která za zvolenou dobu zháší 50 % radikálů DPPH1. Cílem práce bylo vypracování kinetické metody stanovení antiradikálové aktivity na základě určení rychlostních konstant reakce. Výchozí podmínky reakce jsme volili tak, že jeden ze substrátů byl přítomen v mnohem vyšší koncentraci než druhý substrát. Narozdíl od stanovení při nadbytku antioxidantu, stanovení při nadbytku DPPH umožňovalo určení rychlostní konstanty reakce a počtu radikálů DPPH zhášených 1 molekulou antioxidantu. Touto metodou jsme stanovili antiradikálovou aktivitu 24 antioxidantů, převážně fenolických kyselin. Místo očekávaného druhého řádu se reakce vždy překvapivě řídila kinetikou prvního řádu. Nejrychleji reagovala s DPPH kyselina askorbová, která zhášela radikál DPPH přibližně milionkrát rychleji než nejslabší kyselina parahydroxybenzoová. Antiradikálová aktivita závisela, spíše než na počtu fenolických hydroxylů, na reaktivitě nejvíce aktivovaného fenolického hydroxylu. Silnější antiradikálový účinek měly antioxidanty, jejichž struktura umožňuje vyšší stabilizaci vzniklého fenolického radikálu přítomností dvojné vazby v postranním řetězci antioxidantu nebo přítomností hydroxylové nebo methoxylové skupiny na sousedních uhlících. Vypočítanou rychlostní konstantu lze, narozdíl od dříve používaných způsobů vyhodnocení, použít k přesnému a jednoduchému vyjádření antiradikálové aktivity. |
| Související projekty: |