Studium genové exprese u T. pallidum.

Logo poskytovatele

Varování

Publikace nespadá pod Filozofickou fakultu, ale pod Lékařskou fakultu. Oficiální stránka publikace je na webu muni.cz.
Autoři

MATĚJKOVÁ Petra ŠMAJS David NORRIS S.J. WEINSTOCK G.M.

Rok publikování 2005
Druh Článek ve sborníku
Konference Sborník příspěvků IX. Pracovního setkání biochemiků a molekulárních biologů
Fakulta / Pracoviště MU

Lékařská fakulta

Citace
Obor Genetika a molekulární biologie
Klíčová slova Treponema pallidum subsp. pallidum; gene expression profiling; BAC clones
Popis Spirocheta Treponema pallidum subsp. pallidum je původcem venerické syfilis, vysoce invazivního onemocnění postihujícího v pozdním stadiu systémově celý organismus. Nemožnost kontinuální kultivace v in vitro podmínkách vyžaduje užití genomických přístupů pro výzkum tohoto neobvyklého patogenu. Byla připravena BAC knihovna chromozomální DNA T. pallidum v E. coli. 19 klonů této knihovny představuje minimální set obsahující 99,8 % předpovězených genů (ORF). Byla stanovena exprese genů T. pallidum v E. coli. Expresní profil genů v BAC knihovně představuje první krok pro studium regulace genové exprese genů T. pallidum. 5 treponemálních genů kódujících proteiny s domnělou regulační funkcí bylo naklonováno do expresních vektorů pBAD kompatibilních s replikačním systémem BAC. V expresním vektoru pBAD jsou tyto geny pod kontrolou arabinózového promotoru, který umožňuje regulovat jejich expresi pomocí hladiny arabinózy v kultivačním mediu. Tyto vektory byly transformovány do minimální sady BAC knihovny. Celková RNA celé sady transformované vektorem s domnělým transkripčním regulátorem byla porovnána s relevantní kontrolou s vektorem bez inzertu metodami DNA microarray hybridizace na čipu T. pallidum a kvantitativní PCR. Byly vyšetřeny geny rpoN, fhlA, hisK, soj a troR. Proteiny RpoN, FhlA a HisK byly potvrzeny jako pozitivní regulátory a produkt genu soj jako negativní regulátor. U genu troR nebyla potvrzena jeho negativní regulační funkce. Byla také vyšetřena RNA izolovaná z časově omezené kultivace treponem na tkáňových kulturách králičích epiteliálních buněk a z experimentálních lézí na králičí kůži. RNA z takto získaných organismů byla podrobena expresní analýze metodou kvantitativní PCR a výsledky byly porovnány s expresním profilem treponem izolovaných z králičích testes.
Související projekty:

Používáte starou verzi internetového prohlížeče. Doporučujeme aktualizovat Váš prohlížeč na nejnovější verzi.