Development of electrophoretically mediated microanalysis method for the kinetics study of flavin-containing monooxygenase in a partially filled capillary

Varování

Publikace nespadá pod Filozofickou fakultu, ale pod Přírodovědeckou fakultu. Oficiální stránka publikace je na webu muni.cz.
Název česky Vývoj elektrokineticky zprostředkované mikroanalytické metody pro kinetickou studii flavin obsahující monooxygenasy v částečně plněné kapiláře
Autoři

HAI Xin KONEČNÝ Jiří ZEISBERGEROVÁ Marta ADAMS Erwin HOOGMARTENS Jos VAN SCHEPDAEL Ann

Rok publikování 2008
Druh Článek v odborném periodiku
Časopis / Zdroj Electrophoresis
Fakulta / Pracoviště MU

Přírodovědecká fakulta

Citace
Obor Biochemie
Klíčová slova Clozapine EMMA flavin containing monooxygenase kinetics
Popis byla vyvinuta metoda elektroforeticky zprostředkované mikroanalýzy s využitím částečného plnění kapiláry pro flavin obsahující monooxygenasu, forma 3 (FMO3). In-line enzymatická reakce byla provedena ve 100 mM fosfátovém pufru (pH 7,4) zatímco 150 mM fosfátový pufr (pH 3,3) byl použit jako základní elektrolyt. Dlouhá zóna kofaktoru NADPH rozpuštěného v rekčním pufru, byla nadávkována hydrodynamicky do křemenné kapiláry a následována zónou enzymu a substrátu. Reakce byla iniciována v teplotně kontrolované částikapiláry při 37C aplikací napětí 9kV po 0,9 min. Napětí bylo vypnuto, aby vzrostlo množství produktu (tzv. zero potential amplification) a následně opět zapnuto konstatní napětí 10 kV pro separaci všech látek, které byly detekovány při vlnové délce 191 nm. Vyvinutá metoda elektroforeticky zprostředkované mikroanalýzy byla aplikována na kinetiskou studii FMO3 s využití clozapinu jako substrátu. Konstanta Michaeli-Mentenové hodnoty 410,3 uM byla vypočtena z korigovaných ploch píku produktu clozapinu N-oxidu. Hodnota maximální rychlosti (Vmax.) byla vypočtena 1,86 nmol/nmol enzymu/min. Kinetické parametry FMO3 jsou ve shodě s publikovanými daty.
Související projekty:

Používáte starou verzi internetového prohlížeče. Doporučujeme aktualizovat Váš prohlížeč na nejnovější verzi.