In-capillary approach to drug metabolite generation with subsequent electrophoretic separation

Varování

Publikace nespadá pod Filozofickou fakultu, ale pod Přírodovědeckou fakultu. Oficiální stránka publikace je na webu muni.cz.
Název česky Tvorba metabolitů léčiva v kapiláře a jejich následná elektroforetická separace
Autoři

ZEISBERGEROVÁ Marta GLATZ Zdeněk HOOGMARTENS Jos VAN SCHEPDAEL Ann

Rok publikování 2009
Druh Článek ve sborníku
Konference EURO ANALYSIS 2009
Fakulta / Pracoviště MU

Přírodovědecká fakulta

Citace
Obor Biochemie
Klíčová slova capillary electrophoresis- in-capillary microreaction-drug metabolism-microsomes-method development
Popis Studium metabolismu léčiv jsou nezbytnou součástí farmakologického výzkumu. Lidské jaterní microsomy jsou obecně přijímaným in vitro systémem pro takové studie. Cytochromy P450 jsou nejvíce zastoupené proteiny mikrosomální frakce jater a jsou odpovědné za biotransformaci xenobiotik. Dextromethorphan (DEX) byl zvolen jako sledované léčivo, které je enzymaticky přeměněno na tři možné metabolity. Hlavním enzymem přeměny je cytochrom P450 (CYP), isoforma 2D6, a účastní se i CYP3A4 za vzniku 3-metoxymorfinanu, 3-hydroxymorfinanu a dextrorfanu. Elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza (EMMA) je technika odvozená od CE. V této metodě je kapilára využita jako reakční nádoba a představuje vhodný formát pro on-line enzymatické reakce. Odlišná elektroforetická mobilita enzymu a jeho substratu umožňuje promíchání jednotlivých zón dohromady, provést biotransformaci a následně i separaci substrátu a jeho metabolitů. Taková konfigurace je vhodná k automatizace a kontrole doby kontaktu enzymu a substrátu. V této práci jsme se zaměřili na vývoj metody pro současné stanovení DEX a jeho tří metabolitů vzniklých přímo v kapiláře na jejím dávkovacím konci. Reakce probíhala po přímém nadávkování mikrosomů nebo rekombinantního CYP 2D6 isoenzymu. Optimální seprační podmínky byly dosaženy v roztoku tetraboritanu sodného (80 mM, pH 9,8) s přídavkem 2-peopanolu (8%, v/v) při 37C a dovolovaly provést separace jak off-line, tak i on-line inkubovaných vzorků. Technika částečného plnění kapiláry umožnila kombinovat separační a inkubační pufr v rámci jedné kapiláry. Hlavní části optimalizace, provozní nastavení a parametry dávkování jsou diskutovány. Byly porovnány výsledky inkubace s mikrosomy a rekombinantním CYP2D6.
Související projekty:

Používáte starou verzi internetového prohlížeče. Doporučujeme aktualizovat Váš prohlížeč na nejnovější verzi.