In-capillary approach to drug metabolite generation with subsequent electrophoretic separation
| Název česky | Tvorba metabolitů léčiva v kapiláře a jejich následná elektroforetická separace |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2009 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | EURO ANALYSIS 2009 |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Biochemie |
| Klíčová slova | capillary electrophoresis- in-capillary microreaction-drug metabolism-microsomes-method development |
| Popis | Studium metabolismu léčiv jsou nezbytnou součástí farmakologického výzkumu. Lidské jaterní microsomy jsou obecně přijímaným in vitro systémem pro takové studie. Cytochromy P450 jsou nejvíce zastoupené proteiny mikrosomální frakce jater a jsou odpovědné za biotransformaci xenobiotik. Dextromethorphan (DEX) byl zvolen jako sledované léčivo, které je enzymaticky přeměněno na tři možné metabolity. Hlavním enzymem přeměny je cytochrom P450 (CYP), isoforma 2D6, a účastní se i CYP3A4 za vzniku 3-metoxymorfinanu, 3-hydroxymorfinanu a dextrorfanu. Elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza (EMMA) je technika odvozená od CE. V této metodě je kapilára využita jako reakční nádoba a představuje vhodný formát pro on-line enzymatické reakce. Odlišná elektroforetická mobilita enzymu a jeho substratu umožňuje promíchání jednotlivých zón dohromady, provést biotransformaci a následně i separaci substrátu a jeho metabolitů. Taková konfigurace je vhodná k automatizace a kontrole doby kontaktu enzymu a substrátu. V této práci jsme se zaměřili na vývoj metody pro současné stanovení DEX a jeho tří metabolitů vzniklých přímo v kapiláře na jejím dávkovacím konci. Reakce probíhala po přímém nadávkování mikrosomů nebo rekombinantního CYP 2D6 isoenzymu. Optimální seprační podmínky byly dosaženy v roztoku tetraboritanu sodného (80 mM, pH 9,8) s přídavkem 2-peopanolu (8%, v/v) při 37C a dovolovaly provést separace jak off-line, tak i on-line inkubovaných vzorků. Technika částečného plnění kapiláry umožnila kombinovat separační a inkubační pufr v rámci jedné kapiláry. Hlavní části optimalizace, provozní nastavení a parametry dávkování jsou diskutovány. Byly porovnány výsledky inkubace s mikrosomy a rekombinantním CYP2D6. |
| Související projekty: |