Detekce a lokalizace genetických determinant faktorů virulence u Staphylococcus aureus pomocí molekulárních sond
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2003 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | VII Pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Genetika a molekulární biologie |
| Klíčová slova | Staphylococcus; virulence factors; molecular probes; PCR |
| Popis | Alimentární enterotoxikózy, toxické epidermolýzy anebo syndrom toxického šoku jsou onemocnění způsobená toxickými exolátkami, produkovanými patogenními kmeny S. aureus. V této práci byly Southernovou hybridizací s digoxigeninem značenými molekulárními sondami, připravenými v PCR, lokalizovány sekvence genů kódujících enterotoxiny B, C1 a C2,3, exfoliatin A a termostabilní nukleázu (TN) na restrikčních spektrech HindIII a EcoRI nebo na makrorestrikčním spektru SmaI. Gen seb byl u všech SEB-pozitivních kmenů lokalizován v EcoRI spektru ve dvou kopiích na fragmentech 1,5-kb a 3,6-kb nebo 8,6-kb; v HindIII spektru pak většinou na fragmentu 6,1-kb, zatímco ve SmaI spektru se tento gen vyskytoval na různých fragmentech. Gen sec1 byl lokalizován nejčastěji na EcoRI fragmentu 8,5-kb a na HindIII fragmentu 5,0-kb. Ve SmaI spektru byl sec1 potvrzen na fragmentech ~44-kb, ~23-kb nebo ~74-kb. Gen eta byl u ETA-pozitivních kmenů většinou lokalizován na těchto fragmentech: SmaI ~200-kb, EcoRI 4,9 a 2,5-kb a na HindIII 6,2 a 4,2-kb. Gen sec2,3 byl zjištěn na větším počtu EcoRI a HindIII fragmentů a ve SmaI spektru pak nejčastěji na fragmentech ~44-kb a ~100-kb. Výskyt většího počtu signálů indikuje více kopií sekvencí genů kódujících enterotoxiny B a C. Hybridizací nebyla prokázána přítomnost genů seb, sec1 a sec2,3 na plazmidové DNA. Gen nuc, kódující termonukleázu, byl lokalizován na SmaI fragmentech ~280-kb až ~370-kb. Hybridizace kolonií umožnila detekovat přítomnost genu sec1 přímo v genomu bakterií vyrostlých v koloniích na živném agarovém médiu. Bylo prokázáno, že hybridizace genomové DNA se specifickou molekulární sondou vhodně doplňuje a upřesňuje molekulární diagnostiku virulentních kmenů S. aureus. |
| Související projekty: |