Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1

Varování

Publikace nespadá pod Filozofickou fakultu, ale pod Přírodovědeckou fakultu. Oficiální stránka publikace je na webu muni.cz.
Autoři

PEKÁROVÁ Blanka BORKOVCOVÁ Petra BRZOBOHATÝ Břetislav URBANÍKOVÁ Ľubica HEJÁTKO Jan JANDA Lubomír

Rok publikování 2007
Druh Článek ve sborníku
Konference Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti
Fakulta / Pracoviště MU

Přírodovědecká fakulta

Citace
www http://rustreg.upol.cz/fyzdny2007
Obor Genetika a molekulární biologie
Klíčová slova cytokinins; histidine kinase; CKI1; receiver domain; purification
Popis Cytokininy patří spolu s auxiny ke klíčovým regulátorům růstu rostlin. Potenciálním regulátorem přenosu cytokininového signálu u Arabidopsis thaliana byla identifikována receptorová histidinkináza CKI1. Tato histidinkináza se skládá z extracelulárně lokalizované, na membráně vázané receptorové domény, z intracelulární histidinkinázové domény a přijímačové domény (RD). Vzhledem k velikosti a různosti domén CKI1 je nutné pro určení struktury tohoto proteinu připravit jednotlivé domény samostatně. RD CKI1 byla klonována do expresního vektoru a exprimována v E. coli. Protein byl purifikován ve dvou krocích (Hi Trap Chelating HP se Zn2+ a Hi Load 16/60 Superdex 75) pomocí FPLC systému. Výtěžnost byla ovlivněna složením pufrů, kdy za použití Tris/HCl pufru bylo získáno ~27 mg proteinu/1L bakteriální kultury a při použití fosfátového pufru klesl výtěžek purifikace na ~19 mg/1L bakteriální kultury. Získaný protein byl homogenní za nativních i denaturačních podmínek na PAGE a jeho čistota byla >95%. Stabilita proteinu byla zvýšena za přítomnosti EDTA. Protein byl použit na krystalizační pokusy a byly získány první krystaly proteinu. V současné době jsou podmínky krystalizace optimalizovány.
Související projekty:

Používáte starou verzi internetového prohlížeče. Doporučujeme aktualizovat Váš prohlížeč na nejnovější verzi.