Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1

Warning

This publication doesn't include Faculty of Arts. It includes Faculty of Science. Official publication website can be found on muni.cz.
Title in English Purification and crystallization of the receiver domain of the receptor histidine kinaseCKI1
Authors

PEKÁROVÁ Blanka BORKOVCOVÁ Petra BRZOBOHATÝ Břetislav URBANÍKOVÁ Ľubica HEJÁTKO Jan JANDA Lubomír

Year of publication 2007
Type Article in Proceedings
Conference Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti
MU Faculty or unit

Faculty of Science

Citation
Web http://rustreg.upol.cz/fyzdny2007
Field Genetics and molecular biology
Keywords cytokinins; histidine kinase; CKI1; receiver domain; purification
Description Cytokininy patří spolu s auxiny ke klíčovým regulátorům růstu rostlin. Potenciálním regulátorem přenosu cytokininového signálu u Arabidopsis thaliana byla identifikována receptorová histidinkináza CKI1. Tato histidinkináza se skládá z extracelulárně lokalizované, na membráně vázané receptorové domény, z intracelulární histidinkinázové domény a přijímačové domény (RD). Vzhledem k velikosti a různosti domén CKI1 je nutné pro určení struktury tohoto proteinu připravit jednotlivé domény samostatně. RD CKI1 byla klonována do expresního vektoru a exprimována v E. coli. Protein byl purifikován ve dvou krocích (Hi Trap Chelating HP se Zn2+ a Hi Load 16/60 Superdex 75) pomocí FPLC systému. Výtěžnost byla ovlivněna složením pufrů, kdy za použití Tris/HCl pufru bylo získáno ~27 mg proteinu/1L bakteriální kultury a při použití fosfátového pufru klesl výtěžek purifikace na ~19 mg/1L bakteriální kultury. Získaný protein byl homogenní za nativních i denaturačních podmínek na PAGE a jeho čistota byla >95%. Stabilita proteinu byla zvýšena za přítomnosti EDTA. Protein byl použit na krystalizační pokusy a byly získány první krystaly proteinu. V současné době jsou podmínky krystalizace optimalizovány.
Related projects:

You are running an old browser version. We recommend updating your browser to its latest version.