Stanovení malondialdehydu v biologických vzorcích pomocí kapalinové chromatografie
| Title in English | DETERMINATION OF MALONDIALDEHYDE IN BIOLOGICAL SAMPLES BY HPLC |
|---|---|
| Authors | |
| Year of publication | 2003 |
| Type | Article in Proceedings |
| Conference | Proceeding of 15th International Conference "Chromatographic Methods and Human Health" |
| MU Faculty or unit | |
| Citation | |
| Field | Biochemistry |
| Keywords | Malondialdehyde HPLC |
| Description | Malondialdehyd (MDA) je pro živé systémy vysoce toxickou látkou. Vzniká jako sekundární produkt při peroxidaci polynenasycených mastných kyselin. Jeho množství odráží intenzitu neenzymové peroxidace lipidů, probíhající radikálovou reakcí iniciovanou reaktivními formami kyslíku, ale i míru aktivace enzymové peroxidace, probíhající při biosyntéze ikosanoidů. Ve vodném prostředí se MDA vyskytuje v různých formách v závislosti na hodnotě pH, v biologických vzorcích je zastoupen jako volný nebo vázaný na proteiny. MDA lze stanovit přímo nebo po jeho derivatizaci, nejběžněji s thiobarbiturovou kyselinou (TBA) za vzniku komplexu MDA(TBA)2 (viz obr.), který lze detekovat fotometricky při 532 nm nebo spektrofluorimetricky. V komplexní matrici, jakou je např. plazma, se však vyskytuje nebo během vlastní derivatizace vzorku vzniká celá řada interferujících látek. Proto již byla pro zvýšení specifičnosti i senzitivity stanovení vyvinuta řada metodik a technik eliminující tyto interferující látky. Nicméně, získané výsledky pomocí těchto často náročných postupů jsou mnohdy totožné jako při použití jednoduchých spektrofotometrických metod. Cílem této studie bylo vypracovat jednoduchou a reprodukovatelnou metodiku pro stanovení celkového MDA v lidské plazmě a v moči. Byly optimalizovány podmínky derivatizace a separace na reverzně-fázových kolonách pomocí HPLC s fluorescenční i UV detekcí. Hodnoty získané pomocí HPLC metody byly v porovnání se spektrofotometrickou metodou signifikantně nižší, nicméně v dobré korelaci. Metoda byla ověřena a použita v klinickém výzkumu. |
| Related projects: |