Stanovení aktivity isoformy CYP450 2C9 pomocí micelární elektrokinetické chromatografie
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2006 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | X. pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů. |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Biochemie |
| Klíčová slova | CE; MEKC; cytochrome P450 2C9; metabolism |
| Popis | Nejčastěji je v dnešní době ke studiu metabolismu cizorodých látek používána kapalinová chromatografie (HPLC) ve spojení s UV (LC-UV) a fluorescenční (LC-fluorescence) detekcí, ojediněle pak ve spojení s hmotnostní spektrometrií (LC-MS). Tyto metody jsou však náročnější na objemy chemikálií a vzorků nutných k úspěšnému provedení analýzy. Výhodou kapilární elektroforézy (CE) je její časová nenáročnost a hlavně i malá spotřeba vzorku, která je především důležitá v případě enzymových preparátů, substrátů, případně inhibitorů. Automatizace všech kroků vlastního stanovení navíc eliminuje experimentální chyby. Micelární elektrokinetická chromatografie (MEKC) patří mezi nejpoužívanější módy CE. Její velkou výhodou oproti HPLC je snadnější příprava vzorků nevyžaduje předpřípravu biologických vzorků jako je např. extrakce. Cytochrom P450 je v současné době označení pro rozsáhlou skupinu hemoproteinů, přičemž tyto izoformy zřejmě pochází ze společného proteinu, ze kterého se vytvořily během biologické evoluce. V současnosti je známo více než 270 různých genových rodin cytochromu P450, z nichž 18 je prokázáno u savců, u nichž se podílejí na biosyntéze a metabolismu sterolů a steroidních hormonů, na metabolismu různých lipidických biofaktorů včetně necyklických uhlovodíků - eikosanů, vitamínu D3 a retinoidů. Hlavní funkcí, kterou plní cytochromy P450 v organismu, je oxidativní metabolismus cizorodých látek. Pro sledování metabolické aktivity isoformy 2C9 cytochromu P450 se využívají tolbutamid a diclofenac a jejich hydroxylace na 4-hydroxy- tolbutamid resp. 4-hydroxydiclofenac.V návaznosti na tuto skutečnost byla vypracovaná metoda pro stanovení aktivity mikrosomálního cytochromu P450 a jeho isoformy 2C9 pomocí MEKC v off-line módu. Vypracovaná metoda je použitelná pro stanovení obou substrátů a jejich metabolitů pouze s rozdílem ve výběru vlnové délky při detekci. Její nezanedbatelnou výhodou oproti klasickému stanovení pomocí HPLC je odstranění extrakčního kroku z přípravy vzorku pro analýzu. |
| Související projekty: |